圖1  悟空K2025二維液相色譜系統(tǒng)

圖2  在線固相萃取-二維高效液相色譜法同時分析V_A、V_D、V_E閥切換示意圖

表1  二維液相系統(tǒng)色譜條件

圖3  混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進樣6針疊加色譜圖

注：1：VA；2：δ-VE；3：β-VE；4：γ-VE；5：α-VE；6：VD₂；7：VD₃

對V_A、V_D、V_E混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行測試及重復(fù)性考察（圖3），三種維生素均具有極佳的峰形；如表2所示，β-VE和γ-VE的分離度為1.76，VD₂和VD₃的分離度為2.35，均可實現(xiàn)良好分離。如表3所示，三種維生素保留時間RSD均≤0.09 %，峰面積的RSD均≤0.72 %，具有良好的定性定量重復(fù)性。

標(biāo)準(zhǔn)品的V_A、V_D、V_E在其線性濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R均≥0.9999。

圖4 嬰幼兒配方奶粉樣品一維和二維色譜圖

注：1：VA；2：δ-VE；3：β-VE；4：γ-VE；5：α-VE；6：VD₂；7：VD₃

嬰幼兒配方奶粉試樣中V_A、V_D、V_E的含量范圍為0.0 mg/100g~10 mg/100g；兩次獨立測定結(jié)果的相對偏差范圍為-0.85 %~4.58 %，滿足《T/SHFCA 002-2024 特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中維生素A、D、E的測定 在線固相萃取-二維液相色譜法》中規(guī)定的在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的15%的要求；加標(biāo)回收實驗中， V_A、V_D、V_E的回收率范圍為98.0 %~106.0 %。